Awọn imọran ipilẹ fun ogbin ti awọn asa sẹẹli

Awọn imọran ipilẹ fun ogbin ti awọn asa sẹẹli

Awọn sẹẹli tẹsiwaju iṣelọpọ wọn lakoko awọn iṣẹ idagba deede, eyiti o nilo ikopa ti ọpọlọpọ awọn alaṣẹ. Nigbati iwọn otutu ba lọ silẹ ni isalẹ -70 ° C, aabo duro ṣiṣẹ. Nitorinaa, ni agbegbe pẹlu awọn iwọn otutu kekere, awọn sẹẹli le da awọn iṣẹ itọju itọju wọn silẹ ki o tẹ ipin ipin iwọnwọn ti o fun laaye ipamọ igba pipẹ.

1. Awọn ohun elo esiperimenta

Awọn ohun elo mimọ:

Alagba aye arun

Omi ara (awọn fbs agbegbe / NBS)

Ultraputare

Dile diathy gaasi sulfoxide (DMSO)

Egan PBs Phosphate iyọ iyọ iyọ

Ibo ni ibon

Iboni ti o pinetiting ina

Igbaradi ti awọn adanwo

a) igbaradi ti ojutu didi:

Awọn sẹẹli Gbogbogbo: 55% Alabọde Bassal + 40% bovie ara omi ara (FBS / NBS) + 5% DMSO

Awọn sẹẹli to ṣe pataki: 90% Omi-ara Evine (FBS / NBS) + 10% DMSO

Alologtion ti a ti pese serepsopreserirararad sinu tube centrificeomi hunme [itẹ -i] ki o tọju ni 4 ° C fun lilo nigbamii.

(b) Igbaradi ti awọn sẹẹli lati di mimọ:

Ṣaaju ki dididi awọn sẹẹli, yan Awọn sẹẹli Pẹlu Ipo idagba ti o dara ati ni logabic ti o dara lose ki o rọpo wọn pẹlu alabọde alabapade 12 ọjọ lati ṣetọju ipo sẹẹli.

2. Ilana esiperimenta

1. Ṣakiyesi iwuwo ti awọn sẹẹli lati tutu, eyiti o jẹ to 80% ~ 90%. Lo ibọn pipotte kan lati ṣe alaye alabọde atijọ, ṣafikun awọn sẹẹli PBS lati wẹ awọn sẹẹli 1-2, ki o yọ alabọde to ku kuro ni agbegbe aṣa.

2. Ṣafikun iye ti o yẹ ti trypsin tabi oje ti o jẹ ounjẹ lati gba trypsin lati tẹ awọn sẹẹli sii, ki o gbe wọn sinu incubator fun tito nkan lẹsẹsẹ fun tito nkan lẹsẹsẹ fun tito nkan lẹsẹsẹ fun tito nkan lẹsẹsẹ. Ṣe akiyesi majemu ti awọn sẹẹli labẹ ẹrọ macroplasm n reti ati awọn sẹẹli ko ni asopọ mọ si awọn sheets. Ni aaye yii, ṣafikun ojutu iduro lati da ilana tito nkan lẹsẹsẹ naa duro.

3. Kira bumble awọn sẹẹli pẹlu imọran lati fẹlẹfẹlẹ kan ni idaduro sẹẹli ati idadoro sẹẹli ni 1000 RPM fun iṣẹju 3-5.

Sọẹgbẹwẹ, ṣafikun iye ti o yẹ ti didanu, ati rọra pipotte lati jẹ ki awọn sẹẹli ka deede. Ṣatunṣe iwuwo sẹẹli pẹlu alabọde cropreres lati ṣe iwuwo ikẹhin 5 × 106 / ML ~ 1 × 107 / ML.

4. Lo ibon pipotte kan lati ya awọn Falobe iṣọn gẹgẹ bi agbara iṣọn, ki o lo ẹrọ iṣelọpọ aifọwọyi lati fila ati edidi.

5. Eto idapọmọra boṣewa jẹ oṣuwọn itutu agbaiye ti -1 ° C si -2 ° C / Mins, ati awọn sẹẹli si didi 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C ° C (lojumọ)} Ibi ipamọ igba pipẹ ninu omi omi omi.

O tun le wa ni fipamọ taara ni firisa ni -80 ° moju ati lẹhinna gbe si nitrogen omi fun ipamọ.

Yongyue Media jẹ ile-iṣẹ imọ-giga kan ti o ni pataki ni R & D, iṣelọpọ ati tita ti awọn iṣẹ to ni agbara. Awọn imọran Pipette, awọn Pipettes, awo Prr, awọn ọja aṣa aṣa miiran ati awọn oluwo imọ-ẹrọ miiran ti ẹkọ. Awọn iṣoogun Yoongyee jẹ yẹ ti igbẹkẹle ati yiyan rẹ! Kaabọ lati jiroro!